Панлейкопения (чума кошек)

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА РARVOVIRIDAE
Парвовирусы имеют уникальную структурную и функциональную организацию генома и являются хорошей моделью для изучения репликации 1-спиральной ДНК.
Парвовирусы (от лат. parvus - маленький) - группа вирусов, поражающая позвоночных и насекомых. Вирионы парвовирусов представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки изометрические частицы кубической симметрии диаметром 18-22 нм. Капсид состоит из 32 капсомеров диаметром 3-4 нм. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаружены. Мол.м. вирионов составляет 5,5-6,2 МД, плавучая плотность в CsCl 1,39-1,42 г/см3, коэффициент седиментации 110 – 122 S. Парвовирусы устойчивы к растворите-лям липидов, стабильны при рН 3-9, а также к прогреванию при 56°С в течение 1 ч. Геном парвовирусов представлен 1 -спиральной линейной молекулой ДНК с мол.м. 1,5-2 МД, доля Г+Ц составляет 41-53%. ДНК парвовирусов обладает инфекционностью. В вирионах автономных и дефектных парвовирусов обнаружено 3 полипептида с мол.м. 60-90 кД, тогда как в вирионах денсовирусов - 4 полипептида. Репликация вирусной ДНК и сборка вирионов происходит в ядре клетки. Для репликации автономных парвовирусов требуются компоненты ДНК-синтезирующего аппарата клетки-хозяина, в частности, α- и β-ДНК-полимеразы, синтезируемые в 8-фазе клеточного цикла. Депендовирусы активно размножаются в присутствии вирусов "помощников" (аденовирусов, герпесвирусов).
В семействе Раrvoviridae различают 3 рода: Раrvovirus, Dependovirus, Densovirus.
1. Род Раrvovirus. В состав рода входят: мелкий вирус мышей (прототипный вирус), парвовирусы человека, свиней, КРС, собак, кроликов, енотов, гусей, крыс, вирусы энтерита и алеутской болезни норок, панлейкопении кошек, а также вирусы Н1, RT, ТVХ и Lu III, происхождение которых неясно. Возможным представителем рода являются парвовирус цыплят, мелкий вирус собак, НВ и RА1. 1-спиральиая геномная ДНК состоит примерно из 5 тыс. нуклеотидов и кодирует 4 белка - 3 структурных и 1 неструктурный. На обоих концах ДНК имеются неидентичные, самокомплементарные последовательности нуклеотидов (палиндромы), образующие 2-спиральные шпильки, резистентные к нуклеазе S1; 3' -концевая шпилька состоит из 115-116 нуклеотидов, а 5'-концевая - из 200-242. Шпилечные структуры играют важную роль в репликации ДНК. Гены, кодирующие структурные белки, расположены в 5'-концевой половине, а ген, кодирующий неструктурный белок - в 3' -концевой половине ДНК. В вирионах большинства представителей рода содержится минус-ДНК. Однако у части вирионов (1-50%) парвовирусов КРС, крыс, Н1, Lu III и В19 содержится плюс-ДНК. Все вирусы рода Рагvovirus автономны (недефекны). Они вызывают у животных энтериты, гепатиты, миокардиты, геморрагическую энцефалопатию, панлейкопению, гибель эмбрионов и плодов, отставание в росте, подавляют гемато- и лимфопоэз, иммунный ответ.
2. Род Dependovirus (от лат. dependere - зависимый). В род входят аденоассоциированные вирусы (ААВ) человека и обезьян (5 серотипов), КРС, собак и птиц. Типичный представитель рода - ААВ1, возможные представители - ААВ лошадей и овец. В вирионах депендовирусов содержится либо плюс-, либо минус-ДНК. Эти типы ДНК комплементарны друг другу in vitro объединяются с образованием 2-спиральных молекул. ДНК имеет концевые инвертированные повторы длиной 145 нуклеотидов, формирующие шпильки. Первые 125 нуклеотидов образуют полиндромные последовательности. Эффективная репликация депендовирусов происходит в присутствии адено- и герпесвирусов. Однако в определенных условиях (присутсвие мутагенов, синхронизация клеток в S-фазе) репликация осуществляется и без вирусов–«помощников».
3. Род Densovirus (от лат. densus - плотный). В род входят парвовирусы, поражающие насекомых отряда двукрылых (Diptera), чешуекрылых (Lepidoptera) и прямокрылых (Orthoptera). Типичный представитель рода - вирус денсонуклеоза личинок большой вощинной моли. В вирионах содержится либо плюс-, либо минус-ДНК. Денсовирусы размножаются в большинстве тканей личинок, нимф и взрослых животных без вируса-«помощника» с образованием крупных и плотных кристаллических внутриядерных включений.

1.1. ПАНЛЕЙКОПЕНИЯ КОШЕК
Panleucopenia infectiosa (лат.); Infectiose Enteritis, Agranulozytose, Katzenseuche, Katzenpest, Aleucozytose, Panleukopenie der Katze (нем.); Feline panleucopenia, Infectious feline enteritis (англ.); Leucopenie infectiose des chats (франц.)

Панлейкопения кошек (ПЛК, парвовирусная инфекция кошачьих, агранулоцитоз кошек, чума кошек, кошачья лихорадка, инфекционный энтерит кошек, кошачья атаксия, инфекционный ларинготрахеит кошек) - высококонтагиозная и обычно смертельно протекающая болезнь домашних кошек, клинически проявляющаяся лейкопенией, лихорадкой, рвотой, сильной диареей и крайним обезвоживанием организма. При клинически выраженной болезни погибает 65 – 90% кошек.
Болезнь распространена повсеместно (Франция, США, Англия, Канада, Бразилия и др страны). Болеют, главным образом, молодые кошки, а там, где вирус занесен повторно, – кошки всех возрастов. Восприимчивы все представители семейства Felidae, львы, тигры. В Лондонском зоопарке описаны смертельные случаи болезни львов, гиен и других представителей семейства кошачьих. Наблюдалось заболевание диких кошек, енотов из семейства Procyonidae. Из семейства Mustelidae заражаются только норки.

1.1.1. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ
В США лейкопению среди кошек регистрируют, главным образом, в июле-сентябре. Около 70 % заболевших составляют животные моложе 1 г. Чаще болеют кошки в возрасте 7-12 мес. Болезнь протекает остро и сопровождается высокой температурой (до 42°С), рвотой и лейкопенией (100 – 50 лейкоцитов в 1 мм3). Принято считать, что все случаи лейкопении, когда лейкоцитов меньше 1000 в 1 мм3 крови, вызваны вирусом. При контактном заражении инкубационный период не более 6 дн. Начало болезни характеризуется резким повышением температуры, которая повышается дважды: первый раз удерживается в течении 24 часов, затем снижается и вновь повышается через 48 часов.
Одновременно ухудшается общее состояние животного - оно слабеет и худеет. В результате частой рвоты и обильной, иногда стойкой кровянистой диареи, обезвоживается организм. Наблюдаются истечения из носа и глаз. Тяжёлая лейкопения охватывает все гранулоциты (агранулоцитоз) и другие лейкоциты. С 3-го по 5-й день болезни особенно выражены нейтропения и лимфопения. Активность ферментных систем лимфоидной ткани и тонкого кишечника изменяется. Вначале она снижается, затем возрастает. Высокий уровень активности отмечен в ретикулярных клетках и макрофагах. Изменения активности ферментов прямо пропорциональны деструкции лимфоцитов и гиперплазии ретикулярных клеток с последующей пролиферацией лимфобластов. Для хронического течения болезни характерны устойчивый катар кишечника, анемия и кахексия. У многих кошек болезнь, вероятно, протекает в субклинически и не диагностируется, сопровождаясь формированием иммунитета.
Патологоанатомические изменения не характерны. При вскрытии павших животных находят слизисто-гнойный экссудат на слизистой оболочке носа и глаз, острый энтерит, особенно нижней части подвздошной кишки, увеличение селезёнки, набухание мезентериальных лимфоузлов и «полужидкий» апластический костный мозг. В клетках эпителия кишечника, а также в лимфоузлах обнаруживают внутриядерные эозинофильные включения. Их отличают от включений типа А Каудри, встречающихся в виде гроздевидно скопившихся или рассеянных гранул, которые со временем становятся базофильными. В костном мозге павших животных гистопатологические изменения проявляются гранулопоэзом.

1.1.2. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые идентифицирован во Франции Верж и Христофором в 1928 г., в Англии его выделили в 1933г. (Хиндл и Файнли), а в США - в 1938 г. (Лоуренс и Сайвертон).
Морфология и химический состав. Вирус имеет 1-спиральную ДНК, молекулярная масса которой не определена. Диаметр вириона 20-24 нм, он имеет 32 капсомера, 20 из них гексоны и 12 пентоны. Встречаются вирионы вытянутой формы диаметром 9,5-12 нм. Плавучая плотность в CsCl 1,33 г/см3 .
Устойчивость. Вирус высокоустойчив к фенолу, эфиру, хлороформу, кислотам, трипсину, 0,2%-ному р-ру дезоксихолата натрия, рН 3,0. При 56°С активен в течение 60 мин. Хорошо сохраняется в 50%-ном глицерине, забуференном до рН 7,2. В культуральной вируссодержащей жидкости сохраняется активным при 4 и 25°С в течение 13 мес без снижения титра. Чувствителен к 2-бром-5-дезоксиуридину. Добавление этого препарата в культуральную среду в количестве 20 мгк/мл тормозит репродукцию вируса в 500 раз. Вирус чувствителен к нагреванию в 1 М р-ре MgCl2.
Антигенная структура не изучена.
АГ активность. Вирус индуцирует у кошек образование ВНА и анти-ГА. Первые выявляются на 3-й день после клинического выздоровления и сохраняются несколько лет. Гипериммунные сыворотки титруют в РН и РТГА. Выявлена корреляция титров в РТГА и РН.
АГ вариабельность и родство. Вирус панлейкопении кошек представлен, видимо, одним АГ серотипом (эталонный шт. 193/70). Все штаммы вируса, выявленные в различных географических зонах, не имеют АГ родства с парвовирусами других животных. Однако в 1967г. Джонсон и др. показали серологическую связь этого вируса с вирусами атаксии кошек и энтерита норок. В тесте перекрёстной РН штаммы вируса панлейкопении кошек оказались родственны стандартному вакцинному шт.FPV-TVL. Эталонным штаммом вируса ПЛК является шт.Philiips Raxane.
ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью, причём она у различных штаммов неодинакова. Вирус, выращенный в культуре клеток свиней, также обладает ГА-свойствами. Специфическая ГА проявляется после 2 ч инкубации при 4°С и использовании 0,01 М фосфатного буфера рН 6,8. РГА тормозится антисывороткой. ГА FePV выдерживает обработку эфиром и повышенную температуру. Элюция вируса происходит при 37°С в течение 4 ч Обработка эритроцитов RDЕ предотвращала наступление РГА.
Локализация вируса, вирусовыделение и вирусоносительство. Изучены недостаточно. Переболевшие кошки и норки могут некоторое время выделять вирус.
Экспериментальная инфекция. Кошки и норки заболевают при различных способах заражения. Котята поражаются типичной диарейной формой панлейкопении и погибают на 6-9- й день после заражения. Инкубационный период продолжается 48 ч. Животные других семейств невосприимчивы.
Культивирование. Вирус размножается в культуре клеток почки, селезёнки, лимфоузлов и надпочечников котят и вызывает утончение и шероховатость клеточного монослоя. Он избирательно поражает клетки в состоянии активного митоза через 2-3 ч после клеточного деления. Максимальное развитие ЦПД наступает на 4-5-й день после заражения клеточного монослоя. Через несколько дней вид заражённой культуры обычно не отличается от контрольной. На окрашенных препаратах отмечали увеличение ядрышек, маргинацию хроматина и появление внутриядерных эозинофильных включений типа А Каудри, окружённых ореолом. Позднее эти включения становятся гомогенными и базофильными. Титры культурального вируса колеблются в пределах 102-104 ТДЦ50/мл. Помимо первичных культур клеток, вирус размножается в диплоидных клетках слизистой оболочки языка кошек, диплоидных клетках тимуса и почек кошек, львов, кошачьей фибросаркомы.
Особенности внутриклеточной репродукции. На 3-й день после инфицирования культуры клеток почки котят поражённое ядро увеличивалось, ядерный хроматин становится более тёмным и зернистым. Внутриядерные включения увеличивались в размере, уплотнялись и были окружены резко очередным ореолом. Ядрышки окрашены темнее, напоминали включения, но окружены более светлым ореолом. Края включения относительно ровны; хотя на более поздних стадиях становились сморщенными и зубчатыми. Образование включений зависело от титра вируса в культуре. Цитоплазма поражённых клеток отторжена, перекручена, заметен пикноз.

1.1.3. ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные животные. Инфекция может передаваться через инфицированные домашние вещи. Предполагают возможность естественной передачи болезни инфицированными членистоногим (особенно блохами) или гельминтами.
Спектр патогенности в естественных условиях. Панлейкопенией болеют домашние кошки, но могут поражаться дикие кошки, леопарды, рыси и еноты.

1.1.4. ДИАГНОСТИКА
Предварительный диагноз ставят на основании симптомов болезни и агранулоцитоза. Для выделения вируса из трупов берут кусочки селезёнки, мозга и 12-перстной кишки Часто вирус выделяют от здоровых на вид котят. Внутриядерные включения обычно выявляются на 4-й день во вторичных культурах инфицированных почек котят. Обнаружить внутриядерные включения в эпителиальных клетках тонкого кишечника удаётся лишь у павших животных. Выделенный вирус идентифицируют в РН и РТГА. Ретроспективную диагностику проводят на основании серологических реакций (РН и РТГА) и ИФ.

1.1.5. ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают стойкий иммунитет, а материнские АТ могут некоторое время защищать котят от заболевания. Если в этот период котята контактируют с вирусом, у них может развиться субклиническая иммунизирующая инфекция.
Активную иммунизацию кошек проводят живым аттенуированным или инактивированным вирусом. В США применяют живую вакцину Felido vac L из аттенуированного штамма (вирус, прошедший 10-13 пассажей в культуре ткани хорька). Животные хорошо переносят вакцинацию. Вакцина проявила хорошие защитные свойства. В Англии применяют живую вакцину, полученную путем серийного пассирования вируса в культуре клеток эмбриона кошки. Вакцина обладает хорошим AГ- и иммуногенными свойствами. Через 72 часа после 1-кратного введения кошки становились устойчивыми к экспериментальному заражению. ВНА у животных сохранялись в высоком титре (до 1:512) в течении 23 мес после иммунизации. Практикуется также аэрозольная вакцинация кошек культуральной живой вакциной.
В Англии успешно применяют инактивированную вакцину, предложенную Слатер и Кисеча. Прививать этой вакциной рекомендуют молодняк в возрасте 16 нед двукратно с 3-8 нед интервалом, что обеспечивает невосприимчивость до 16 мес. Живая вакцина создает более напряженный иммунитет.