Пробиотики и стволовые клетки в лечении некоторых заболеваний у кошек

Пробиотики и стволовые клетки в лечении некоторых заболеваний у кошек

Независимо от источника информации, будь то поиск в интернете, социальные сети, реклама на телевидении или личный опыт, владельцы животных становятся все более осведомленными относительно методов лечения распространенных болезней кошек, альтернативных методам, которые ветеринарные врачи традиционно применяют в терапии.
Поэтому мы должны сделать все возможное, чтобы быть на шаг впереди наших клиентов, при этом использовать для комментариев и рекомендаций только информацию, полученную в соответствии с принципами доказательной медицины. Это непростая, но важная задача, если мы надеемся максимизировать эффективность назначаемого нами лечения - как в отношении терапевтического эффекта, так и в отношении затрат клиентов.

Пробиотики

Наши знания о микрофлоре ЖКТ остаются неполными. Мы знаем о существовании нормальных обитателей кишечника, таких как фурмикуты, бактероиды, фузобактерии и т.д.; мы знаем о существовании возбудителей инфекционных заболеваний, включая различные клостридии, кампилобактер, сальмонеллы и виды семейства Escherichia; а также мы знаем, что «дисбиоз» - частая находка у собак с хронической диареей, вызванной заболеванием ЖКТ.

Знания о применении пробиотиков при болезнях ЖКТ еще более неполные. Об эффективности пробиотических добавок известно следующее:

  1. пробиотики должны содержать большое количество микроорганизмов (в современных испытаниях у человека часто используют более высокие дозы, чем применяемые в ветеринарных исследованиях);
  2. микроорганизмы должны быть живыми;
  3. эффект пробиотиков, вероятно, должен развиваться быстро с минимальным сохранением после от-мены препарата;
  4. пробиотики предположительно действуют за счет изменения состава микрофлоры кишечника, но фактически способны оказывать свое действие и другими путями.
  5. к счастью, пробиотики, подобно кобаламину, принадлежат к категории «безвредных», а немногочисленные исключения носят экстраординарный характер.

Пробиотики в литературе, посвященной ветеринарии кошек:

Цитата Популяция (n) Кодовое обозначение Зафиксированный эффект
Marshall et al. AJVR 2006 Здоровые взрослые кошки (12) Lactobacillus acidophilus Повышение количества лактобацилл, снижение количества клостридий и энтерококков
Veir et al. Vet Ther 2007 Котята (9) Enterococcus faecium SF68 (FortiFlora) Повышение количества CD4+ клеток
Lappin et al. JFMS 2009 Кошки с хронической инфекцией, вызванной вирусом герпеса кошек-1 (12) Enterococcus faecium SF68 (FortiFlora) Снижение частоты осложнений
Rishniw et al. JFMS 2011 Кошки с ХБП (10) Azodyl Не удалось уменьшить азотемию при обрызгивании корма препаратом
Garcia et al. FEMS 2011 Здоровые кошки и собаки (12/12) Proviable-DC (Nutramax) Повышение количества пробиотических бактерий в кале
Bybee et al. JVIM 2011 Собаки и кошки из приютов (свыше 100) Enterococcus faecium SF68 (FortiFlora) У кошек существенное снижение числа приступов длительностью свыше 2 дней
Hart et al. JFMS 2012 Хроническая диарея кошек (53) Proviable-DC (Nutramax) У 70% отмечается улучшение течения диареи
Lalor & Gunn-Moore ISFM 2012 Трихомонады (реферат) Enterococcus faecium SF68 (FortiFlora) Сопутствующая терапия снижает частоту рецидивов

 

Кобаламин и хлорамбуцил

Поскольку мы все чаще применяем современный образец «безопасности» - витамин B12, не следует забывать тот факт, что уровень кобаламина может использоваться в качестве метода диагностики. Многие кошки с желудочно-кишечной симптоматикой получают кобаламин независимо от эндогенного уровня этого витамина, и часто этот показатель остается неизмеренным. Однако исследования показывают, что наиболее низкие уровни кобаламина часто обнаруживаются у кошек с лимфомой ЖКТ, а гастроэнтерологи всегда испытывают затруднения с дифференциальной диагностикой воспалительных болезней кишечника и лимфомой ЖКТ. Конечно, это непросто: кошки с воспалительными болезнями кишечника могут иметь крайне низкие уровни кобаламина, а кошки с лимфомой ЖКТ - нормальные уровни, однако мы начинаем с клинической диагностики и прибегаем к методам исследования, чтобы подтвердить или исключить диагноз. В этом случае исходная концентрация кобаламина может дать значимую информацию.

Благодаря исследованию Ruaux и др. 2005 года (JVIM) ветеринарные врачи были предупреждены о важности применения кобаламина (250 мкг подкожно раз в неделю) и его влиянии на кошек с болезнями ЖКТ и выраженной гипокобаламинемией (< 100 нг/л). С момента проведения этого эпохального исследования кобаламин измеряют и у кошек с другими заболеваниями, не относящимися к ЖКТ, так как гипокобаламинемия может быть значимым фактором при целом ряде заболеваний. В 2007 г. Allenspach и др. (JVIM) идентифицировали гипокобаламинемию (< 200 нг/л) как значимый фактор риска неблагоприятного исхода у собак с хроническими энтеропатиями, а уровень кобаламина ниже 150 нг/л как указывающий на лимфому ЖКТ у кошек.

Стволовые клетки

Хроническая энтеропатия кошек, наиболее часто диагностируемая, относится к воспалительным болезням кишечника (ВБК). ВБК у кошек не подразделяются на язвенный колит и болезнь Крона, как у человека. Цитокиновый профиль у кошек с ВБК по сравнению с кошками, страдающими болезнями ЖКТ, не относящимися к ВБК, демонстрирует повышение содержания как иммуномодулирующих цитокинов ИЛ-10 и ФНО-р, так и провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ИЛ-18, ФНО-а и ИЛ-12р40. В отдельном исследовании было показано, что провоспалительные цитокины ИЛ-1, ИЛ-8 и ИЛ-12 повышены у кошек с ВБК. При ВБК у кошек наблюдается явно выраженное нарушение регуляции иммунной системы, и хотя цитокиновый профиль сложен и не до конца изучен, он соответствует реакции типа Th1, которая наблюдается у человека при болезни Крона.

Трофические свойства мезенхимальных стволовых клеток (МСК) вместе с их противовоспалительным и иммуномодулирующим действием теоретически делают их эффективным средством лечения ВБК кошек. Эффективность на раннем этапе зафиксирована в эксперименте у животных и в клинических испытаниях у людей, страдающих болезнью Крона, что дополнительно указывает на необходимость дальнейшего изучения применения терапии МСК при ВБК у кошек. В нашей лаборатории продемонстрировано, что МСК кошек, взятые из жировой ткани (МСКжт), можно получать в достаточно больших количествах, чтобы использовать в клинической практике, что МСКжт прилипают к пластику, имеют веретеновидную форму, которая предполагает способность к дифференцировке по трем линиям, и подавляют T-лимфоцитарную пролиферацию in vitro. Аллогенные МСКжт повторно вводились здоровым и больным кошкам без заметных побочных эффектов. В настоящее время мы проводим слепое плацебо-контролируемое исследование с целью оценки безопасности, осуществимости и клинического эффекта применения аллогенных МСКжт в качестве лечения ВБК у кошек.

Общая информация
Зрелые стволовые клетки
Как следует из названия, зрелые стволовые клетки получают из зрелых тканей, которые фактически включают кровь, плаценту и ткани плода. Зрелые стволовые клетки обнаруживаются практически во всех типах тканей. У взрослых животных зрелые стволовые клетки остаются в специализированных «нишах», помогающих поддерживать их недифференцированное состояние.

Предполагается, что зрелые стволовые клетки используют для репарации тканей и замещения клеток в нормальных условиях.

Существует два основных типа зрелых стволовых клеток - гематопоэтические стволовые клетки (ГСК) и мезенхимальные стволовые клетки (МСК). МСК также называют мезенхимальными стромальными клетками, мультипотентными стромальными клетками и костномозговыми стромальными клетками.
ГСК образуют миелоидные и лимфоидные клеточные линии. Уже несколько десятков лет ГСК используют в клинической практике для трансплантации красного костного мозга.
 
МСК - мультипотентные клетки, которые могут образовываться из множества типов зрелых тканей. Достоверного способа определения клеток МСК нет, но эти веретеновидные клетки обладают тремя отличительными характеристиками: адгезия к пластику, самообновление (ограниченное) и способность подвергаться дифференцировке по трем линиям (хондроциты, адипоциты и остеобласты) (Dominici et al., 2006). МСК в целом - это гетерогенная популяция клеток, а свойства, приписываемые МСК, могут быть обусловлены взаимодействием между различными клетками, образующими культуру МСК. В отличие от эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и индуцированных полипотентных стволовых клеток (иПСК) МСК не требуют питающих слоев для культивирования, а их применение менее спорно. МСК получают от множества разных видов, включая кошек. Дополнительно к их потенциальному применению в репаративной терапии, МСК обнаруживают свойство быть иммунологически привилегированными клетками со способностью к хоумингу и иммуномодулирующими функциями. Эти свойства МСК привлекают к ним значительный интерес в медицине и в ветеринарии как к терапевтическому средству при нескольких патологических процессах.

Присутствие МСК в жировой ткани, которую легко получить в большом количестве, расширяет возможности их исследования и применения. Жировая ткань может быть забрана и обработана коллагеназой в МСК-содержащую стромальную сосудистую фракцию (ССФ). Гетерогенная ССФ иногда используется непосредственно или может культивироваться для получения большого числа МСК. Культивированные МСК зачастую описывают по числу выполненных пассажей, которое обозначает, как много раз клетки забирались и затем повторно культивировались. Для получения наилучших результатов культивированные клетки внимательно наблюдают и обычно используют между вторым и четвертым пассажами.
Несмотря на существенные достижения в исследовании МСК, до сих пор сохраняются противоречия почти по всем вопросам потенциального клинического применения этих клеток: источник и обработка тканей, тип донора, потребность в культивировании, условия культивирования, используемый пассаж клеток, число клеток, время обработки, путь обработки, число обработок, предварительная обработка клеток и т.д. Наши знания о большинстве эффективных стратегий остаются неполными, а в ряде исследований указывается, что некоторые аспекты клеточной терапии могут быть болезнь-специфичными, видоспецифичными и даже пациент-специфичными.

Стволовые клетки кошек
В настоящее время доступная литература по стволовым клеткам кошек ограничена. Идут исследования возможности применения этого типа клеток с регенеративными, иммунологическими, онкологическими (раковые стволовые клетки) и репродуктивными/консервационными целями.

В последние годы нескольким исследовательским группам удалось получить ЭСК кошек. Однако существуют большие сложности с тем, чтобы получить большие количества ооцитов и эмбрионов, а затем надежным образом воспроизвести большое количество клеток и предотвратить дифференцировку ЭСК в течение длительного периода времени. Исследования в этих областях продолжаются. Исследования ЭСК кошек интересны в отношении консервации образцов дополнительно к моделированию болезней для использования как в ветеринарии кошек, так и в медицине. Для потенциального применения ЭСК в клинической регенеративной терапии существует дополнительное препятствие, связанное с иммунным отторжением полученных тканей (Tecirliouglu и Trounson, 2007).

МСК кошек уже применяются в нескольких клинических исследованиях. Клетки успешно получают из красного костного мозга, жировой ткани, пуповинной крови, амниотической жидкости и плодных оболочек. МСК кошек демонстрируют соответствующую клеточную морфологию, адгезию к пластику, способность к размножению при нескольких пассажах (самообновление) in vitro и потенциал к дифференцировке по нескольким линиям при культивировании в соответствующей индукционной среде. Большая часть доступной литературы по МСК кошек носит описательный характер, а функциональные данные отсутствуют. О МСК от других видов известно, что они обладают иммуномодулирующими свойствами и способностью подавлять функцию T-лимфоцитов in vitro. МСК кошек, полученные из жировой ткани, также способны подавлять митоген-индуцированную пролиферацию T-лимфоцитов in vitro (T. Webb, неопубликованные данные), поэтому активно изучается возможность их применения при воспалительных болезнях. Кроме того, полученные из жировой ткани МСК кошек могут безопасно применяться для аллогенных реципиентов без формирования клинически явного иммунного ответа (Quimby и др., 2011, Reinero и др., 2012, Trzil и др., 2012). Аллогенные МСК кошек, полученные из жировой ткани, в настоящее время используются в клинических испытаниях для оценки их терапевтических эффектов в отношении нескольких заболеваний у кошек, включая хронические болезни почек, бронхиальную астму и воспалительные болезни кишечника.

Данные из пилотного исследования, в котором изучают интраренальные инъекции МСК кошек при хронических болезнях почек, показывают, что аутологичные костномозговые и полученные из жировой ткани МСК кошек безопасны, а у двух из четырех кошек отмечалось улучшение оценивавшихся параметров (Quimby и др., 2011). Данные, представленные в рефератах исследований с использованием аллогенных МСК кошек, полученных из жировой ткани, в экспериментальной модели бронхиальной астмы кошек, дополнительно демонстрируют безопасность повторных внутривенных инъекций этого типа МСК (Reinero и др., 2012, Trzil и др., 2012). Некоторые характеристики астматического иммунного ответа у кошек, получивших МСК кошек, последовательно изменялись в пилотном исследовании (Reinero и др., 2012). Данные из пилотного исследования, в котором оценивали возможность использования полученных из жировой ткани МСК кошек для лечения воспалительной болезни кишечника, демонстрируют крайне положительные начальные результаты, а исследование в настоящее время продолжается (C. Webb и T. Webb, неопубликованные данные).

Чем эти методы могут помочь владельцам и их кошкам?
Полученные из жировой ткани мезенхимальные стволовые клетки кошек не являются эмбриональными стволовыми клетками, и поэтому отсутствует существенное препятствие к их применению (основанное на философских, религиозных и этических причинах). Любой из клиентов, имеющий доступ к интернету, способен заразиться энтузиазмом в отношении возможностей терапии стволовыми клетками. А затем он обратится к вам. Доктор Дори Борйессон (Dori Borjesson, Cyranoski 2013) делает вывод, что многие ветеринарные врачи предлагают терапию стволовыми клетками, чтобы удовлетворить запросы клиентов, даже в отсутствие исследований в поддержку этого метода.

В США существуют две ветеринарные компании, конкурирующие в области стволовых клеток: Vet-Stem, предлагающая на рынке Vet- Stem® Regenerative Cell Therapy®, и MediVet America, LLC, предлагающая наборы для самостоятельной подготовки клеток. Большая часть выпускаемых средств применяется у пациентов с ортопедическими и скелетно-мышечными заболеваниями: с хроническим остеоартритом, повреждениями мягких тканей суставов, сухожилий и связок, а также с переломами, хотя в качестве целей применения также указывают гингивит, болезни почек, ВБК и фиброз легких. Ни на одном из веб-сайтов нет ссылок или цитат на какие-либо исследования по применению этих средств у кошек с хроническими энтеропатиями, включая ВБК.

В обоих случаях процесс начинается с забора жировой ткани у пациентов, подлежащих лечению (аутологичная терапия). Компания Vet-Stem доставляет взятую жировую ткань в свою лабораторию для обработки и в течение суток возвращает клиенту готовый к введению продукт (Vet-Stem® Regernerative Cell Therapy®) стоимостью примерно 2000-3500 долларов США при условии, что ветеринарный врач прошел аккредитационный курс компании. Компания MediVet America предоставляет наборы для обработки жировой ткани, которые позволяют приготовить готовый к применению продукт в течение примерно 4 часов. Расходы в этом случае составят примерно 1800 долларов США. Обе компании заявляют о том, что помогли тысячам домашних животных, хотя число получивших лечение кошек не уточняется.

Компания MediVet America утверждает, что «зрелые стволовые клетки концентрируются в жировой ткани». При таком содержании нет необходимости культивировать стволовые клетки, чтобы получить необходимое количество клеток для оказания терапевтического влияния.

Стволовые клетки содержатся в пуле клеток в жирах, это называется стромальной сосудистой фракцией (ССФ). ССФ может оказать противовоспалительное действие, содержит биоактивные пептиды и вносит вклад в обновление и архитектурную организацию. Эти преимущества могут утрачиваться после культивирования клеток. Компания предоставляет ферментную систему для разрушения жировой ткани, фильтр и промывочную жидкость с антибиотиком для стерильности получаемой стромальной сосудистой фракции. Ключевым этапом является активация пролиферации, дифференцировка и индукция перед введением в организм пациента. Компания MediVet утверждает: «на национальном уровне мы наблюдаем клиническое улучшение в 95% случаев артрита».

Компания Vet-Stem обрабатывает жировую ткань в своей собственной лаборатории и возвращает клиенту готовый к применению продукт Vet-Stem Regerative Cells (VSRC™) в течение суток: «функционально различные клеточные популяции способны взаимодействовать с другими клетками в локальном окружении». Цитируем Боба Хармана, главу компании Vet-Stem, Inc.: «в 80% случаев успешно улучшается качество жизни» (Smith, 2013). И снова отсутствуют ссылки или цитаты из исследований по применению этого метода лечения у кошек с хроническими энтеропатиями, включая ВБК. На веб-сайте утверждается, что компания Vet-Stem в настоящее время изучает применение стволовых клеток для лечения ВБК, хронических болезней почек у кошек, болезней печени, иммуноопосредованных болезней и болезней сердца. Там же говорится, что злокачественные новообразования, системные инфекции, неврологические расстройства (включая повреждения спинного мозга), неконтролируемый сахарный диабет и любые другие болезни внутренних органов рассматриваются компанией Vet-Stem как противопоказание для применения терапии.

Стволовые клетки - выводы:

  • Терапия стволовыми клетками в настоящее время не регулируется FDA.
  • «Терапия стволовыми клетками» является фактически введением гетерогенной популяции клеток, включая мезенхимальные стволовые, клетки-предшественницы эндотелия, фибробласты, гематопоэтические, иммунные и другие клетки.
  • Поиск в базе данных PubMed исследований по терапии МСК в случаях заболеваний кошек дает одно пилотное исследование, в котором изучали их применение у кошек с хроническими болезнями почек (Quimby, 2011).
  • Стволовые клетки стали очередным пунктом в длинном списке ветеринарных препаратов, которые мы применяем, далеко не всегда осознавая принцип их действия.
  • Следует продолжать работу с оптимизмом и надеждой, но тщательно обдумывая результаты и относясь к ним с осторожностью.

 

Заключение

  • Диетические вмешательства могут быть не единственным методом терапии, но они должны быть частью эффективного плана.
  • Корм применяют трижды, прежде чем признать его неэффективным; даже разные варианты корма одного типа могут оказаться эффективными.
  • 2 недели, а не 12, или «спасибо, Господи, что я не дерматолог» - принципы для пробной диетотерапии при заболеваниях ЖКТ.
  • Содержание определения диетического вмешательства шире, чем подразумевается под термином диета.

Craig B. Webb, Colorado State University, Fort Collins, CO, USA

Просмотров: 2854

стерилизация кошки недорого

Меню

Собаки

Кошки

Птицы

Занимательно

Ветеринария

Справочник